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首頁實驗耗材文庫 中東呼吸綜合征冠狀病毒實驗室檢測技術(shù)簡述

中東呼吸綜合征冠狀病毒實驗室檢測技術(shù)簡述

2015年06月05日10:29 

中東呼吸綜合征冠狀病毒感染的常規(guī)檢測方法是通過實時反轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)和測序鑒定。有適當(dāng)經(jīng)驗和生物安全條件的實驗室可以嘗試用細胞分離病毒檢測,但不屬于常規(guī)檢測,本指南中未包含病毒分離的步驟。此外,鑒于我國尚無中東呼吸綜合征冠狀病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株和血清學(xué)檢測試劑,此版技術(shù)指南暫不包括血清學(xué)檢測內(nèi)容。

任何中東呼吸綜合征冠狀病毒的檢測都必須在適當(dāng)條件的實驗室由經(jīng)過相關(guān)技術(shù)安全培訓(xùn)的人員進行操作。

目前病毒核酸的檢測方法主要有檢測E蛋白上游基因(upE)、ORF1b基因和ORF1a基因三種。這些方法均高度敏感,檢測ORF1b基因的方法不如針對ORF1a的方法敏感,但比其更加特異。另外,已確定了中東呼吸綜合征冠狀病毒基因組中位于RNA依賴的RNA聚合酶(RdRp)和衣殼蛋白(N)基因的幾個適合測序驗證的靶序列。

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在實驗室要確認(rèn)一個樣本為陽性,需要滿足以下兩個條件的其中

一個:

(一)至少兩種中東呼吸綜合征冠狀病毒特異性PCR結(jié)果陽性;

(二)一種PCR結(jié)果為陽性,另外一種PCR產(chǎn)物序列測序,與已知序列相符。

當(dāng)針對中東呼吸綜合征冠狀病毒的兩種不同的檢測方法結(jié)果不一致的時候,應(yīng)當(dāng)采用反轉(zhuǎn)錄PCR擴增,對擴增產(chǎn)物進行測序以確認(rèn)檢測結(jié)果。

陰性結(jié)果也不能排除臨床病人的感染,一些因素可能產(chǎn)生假陰性,包括:樣本質(zhì)量差,比如口咽等部位的呼吸道樣本;樣本收集的過早或過晚;沒有正確的保存、運輸和處理樣本;技術(shù)本身存在的原因,如;病毒變異,PCR抑制等。

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